Методы лабораторной диагностики вируса иммунодефицита направлены, главным образом, на установление факта наличия этой вирусной инфекции в организме, а также на определение стадии заболевания и мониторинг эффективности проводимой антивирусной терапии.
В настоящее
время разработан и успешно применяется ряд методов тестирования взрослых
пациентов на наличие ВИЧ-инфекции. Многие из этих методов отличаются высокой
точностью. Базовым, повсеместно используемым, методом обнаружения антител к
вирусу иммунодефицита является иммуноферментный анализ, характеризующийся очень
высокой чувствительностью. В этом и кроется главный его недостаток. В небольшом
проценте случаев этот метод может дать ложноположительный анализ на ВИЧ. В
связи, с чем к нему следует относиться с некоторой осторожностью.
Среди прочих причин ложноположительного результата можно выделить наличие париетальных клеток в крови, злокачественные гематологические патологии, вакцинацию против гриппа, инфекции дыхательных путей, гепатит, ревматоидный артрит и прочие.
В
процессе иммуноферментного анализа сыворотку крови растворяют в
четырехсоткратном размере и помещают на специальный планшет, где уже находятся
антигены иммунодефицита. В случае наличия в сыворотке соответствующих антител,
они вступают в связь с антигенами иммунодефицита. Планшет промывается
специальным химическим составом, удаляющим все прочие компоненты сыворотки.
Затем на планшете размещается специально подготовленные вторичные антитела,
которые вступают в связь с антителами уже находящимися на планшете. После чего вновь производится промывка
планшета тем же раствором. Вторичные антитела предварительно химически
связываются с ферментом. И на планшете уже содержится химическое соединение
фермента с вторичными антителами. Далее добавляют субстрат, который вызывает
катализ фермента с последующим изменением цвета или свечением. Самым
противоречивым аспектом результата иммуноферментного анализа, представленного
числовым выражением, является то, что он может дать при определенных
обстоятельствах ложноположительный анализ на ВИЧ. Поэтому рекомендуется
результаты этого самого распространенного метода проверять иными способами.
Например, методом иммуноблоттинга.
Иммуноблоттинг,
подобно иммуноферментному анализу крови, тоже основан на принципе выявления антител к
вирусу иммунодефицита. С той лишь разницей, что в данном случае вирусные белки
предварительно отделяют и иммобилизуют. Что обеспечивает более высокую точность
исследования. На последующих этапах исследования связывание антител,
содержащихся в сыворотке, с определенными антигенами вирусной инфекции также
визуализируется.
Иммуноблоттинг представляет собой следующую процедуру. Белковая субстанция предположительно инфицированных клеток помещается в специальную гелеобразную среду, через которую пропускают разряд электрического тока. Различные белки имеют разную скорость движения, в создавшемся электромагнитном поле, которая зависит от их размеров. При этом электрический заряд белков выравнивается сурфактантом (поверхностно-активным веществом сложной структуры). После отделения белков происходит их смещение к мембране. А затем производится процедура в точности повторяющая иммуноферментный метод тестирования.
На сегодняшний день нет универсального критерия интерпретации результатов данного исследования. Количество вирусных полосок может значительно варьироваться. Если в результате теста не обнаруживают ни одной вирусной полосы, его следует считать отрицательным. В случае обнаружения хотя бы одной соответствующей полосы результат признается положительным. При обнаружении меньше минимально необходимого числа полос результат признают вызывающим сомнения, и пациенту назначается повторное тестирование. Белки ВИЧ-инфекции, используемые в качестве материала для иммуноблоттинга, производятся с использованием рекомбинантной ДНК по технологии RIBA (рекомбинантный иммуноблоттинг).